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    【動物平臺】基因敲除動物定制

     

    基因敲除動物定制

     

    轉基因小鼠制備

    由客戶提供轉基因質粒圖譜、質粒DNA及其相關序列信息,中心負責質粒鑒定、酶切線性化DNA制備、小鼠受精卵顯微注射、注射受精卵移植、移植小鼠孕期觀察飼養、新生小鼠出生記錄及生命維持、編號及鼠尾基因組DNA抽提、轉基因陽性小鼠的PCR鑒定等。

    技術指標:顯微注射用受精卵采自C57BL/6J(♀)與CBA(♂)的F1代;胚胎移植(受精卵輸卵管移植)受體采用ICR代假孕母鼠;受精卵供體、受體及新生仔鼠均維持在SPF級小鼠飼養環境;獲得轉基因質粒六個月內提供3只以上鼠齡4-6周的轉基因陽性小鼠(雜合子Founder),雌雄不限。

    全基因敲除小鼠模型制備

    根據客戶的需求進行打靶載體構建,由客戶提供目標基因的Ensembl序列號,并提出擬剔除區域;中心科研人員設計打靶策略,并反饋客戶,經客戶確認后進行打靶載體的構建及后續研發。中心承諾提供3只以上陽性小鼠。

    技術指標:顯微注射用受精卵采自C57BL/6J(♀)與CBA(♂)的F1代;胚胎移植(受精卵輸卵管移植)受體采用ICR代假孕母鼠;受精卵供體、受體及新生仔鼠均維持在SPF級小鼠飼養環境;陽性小鼠需通過測序證實待敲基因的序列。

    條件性基因敲除或敲入小鼠模型制備

    根據客戶的需求進行打靶載體構建,由客戶提供目標基因的Ensembl序列號,并提出擬剔除(或敲入)區域;中心科研人員根據客戶的需求確定flox或敲入片段插入的區域,經認可后中心科研人員設計打靶策略,并反饋客戶,經客戶確認后進行打靶載體的構建及后續研發。中心承諾提供3只以上陽性小鼠。

    技術指標:顯微注射用受精卵采自C57BL/6J(♀)與CBA(♂)的F1代;胚胎移植(受精卵輸卵管移植)受體采用ICR代假孕母鼠;受精卵供體、受體及新生仔鼠均維持在SPF級小鼠飼養環境。對于基因敲入、flox小鼠各階段均需通過測序證實敲入基因的存在和序列正確。

    模型小鼠胚胎凍存保種

    由客戶提供轉基因或基因敲除雄鼠,中心負責將該小鼠與超排的C57BL/6J交配,取桑椹胚階段的胚胎,并采用玻璃化冷凍的方法進行胚胎凍存,保存在液氮中。

    客戶提供5-10只6-8周齡雄鼠(轉基因陽性鼠或基因敲除雜合子/純合子雄鼠),并提供基因修飾鼠基因型鑒定的引物及條件;中心負責小鼠基因型復檢(PCR方法),將超排后的4-6周齡C57BL/6J雌鼠與基因修飾雄鼠交配,取桑椹胚階段的胚胎,每個品系凍存200枚桑椹胚階段的胚胎。

    凍存小鼠胚胎復蘇繁殖

    冷凍保存的胚胎由客戶運至中心(液氮中運輸),中心按照客戶提供的凍存及復蘇方法,復蘇胚胎,并將胚胎移植到假孕母鼠體內(輸卵管移植或子宮移植),仔鼠出生記錄及基因型鑒定等。

    技術指標:胚胎復蘇并將胚胎移植到假孕母鼠ICR的子宮(每側移植6枚囊胚)內,受體鼠及新生鼠均維持在SPF級小鼠飼養環境中。中心保存的胚胎復蘇后,提供5只以上SPF級轉基因陽性鼠或基因剔除雜合子小鼠,雌雄不限;客戶提供的冷凍胚胎復蘇移植后,所有出生的仔鼠均提供給客戶。

    小鼠胚胎注射(包括原核胚注射和囊胚注射)

    由客戶提供待注射物品,中心負責小鼠胚胎的顯微注射、胚胎的移植、移植小鼠孕期觀察飼養、嵌合體小鼠出生記錄、生命維持等。

    技術指標:顯微注射用胚胎取自C57BL/6J或ICR(由客戶選擇);胚胎移植(受精卵子宮內移植)受體采用ICR代假孕母鼠;胚胎供體、受體及新生仔鼠均維持在SPF級小鼠飼養環境。

    小鼠胚胎操作及品系建立

    本中心還可進行小鼠卵子、精子和胚胎的采集、凍存和復蘇;并可進行體外受精、顯微受精、克隆、胚胎生物凈化、小鼠嵌合胚胎的制備和四倍體胚胎拯救等技術服務。收費標準視具體情況而定。

     

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